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            免疫印跡(Western blot)檢測


            WB檢測是通過SDS-PAGE凝膠將細胞或生物樣品內的蛋白按照蛋白分子量從大到小規律分離開。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(目前主要用HRP標記的第二抗體),經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP反應發出熒光,通過儀器或者膠片顯色)。該技術廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

            實驗流程細胞收集-細胞裂解,蛋白提取-蛋白變性-SDS-PAGE電泳-蛋白質轉膜印記-蛋白封閉-目的抗體孵育-二抗孵育-顯色拍照

            結果示例

                   圖 A不同大小的質粒轉染細胞后,Western blot檢測圖片;B A蛋白不同培養時間后Western blot檢測圖片;C 使用Image pro plus軟件對A蛋白灰度檢測,A蛋白表達變化統計圖       

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