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            MDC檢測方法


            一、主要試劑材料

            細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)(Solarbio,G0170)

            DMEM(Hyclone,SH30023)

            FBS(Hyclone,SH30070.03)

            青鏈霉素(Hyclone,SV30010)

            胰酶(Hyclone,SH30042.01)

            PBS(南京生興,SN331)

            CO2培養箱(Thermo fisher,3131)

            Confocal熒光顯微鏡(Zeiss,LSM710)


            細胞自噬染色MDC檢測.png


            二、實驗方案

            1、MG63及其耐藥株培養在含10%胎牛血清的DMEM完全培養基中培養,培養在37℃含5%CO2的細胞培養箱中培養,當細胞增殖至80%-90%時,用胰酶將細胞消化下來,按照1:3比例傳代。

            2、將1×106個細胞種在3.5cm玻璃底培養皿中,將細胞放入培養箱中培養過夜后,分別加入miR-22、cisplatin、cisplatin和miR-22后,將細胞放入培養箱中培養12h、24h。

            3、將細胞從培養箱中取出,去除培養基,用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。

            4、加入適量MDC Stain,輕輕混勻。

            5、室溫避光染色15~45min。

            6、用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次,棄上清。

            7、加入100μl的Collection buffer重懸細胞,滴加于載玻片上并加蓋玻片。

            8、熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),拍照。


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