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            ROS是什么?

            ROS也就是活性氧(reactive oxygen species,ROS)指來源于氧的自由基和非自由基。ROS在細胞生命,應激和死亡中具介導作用,并且不同濃度的ROS在其中起著截然不同的作用,從而導致細胞命運的不同。因此對ROS的濃度或相對水平進行可靠的測量非常有必。

             

            實驗儀器和材料

            細胞培養基

            胎牛血清

            青霉素/鏈霉素

            胰酶

            PBS

            DMSO

            活性氧(ROS)試劑盒

            血球計數板

            CO2培養箱

            倒置熒光顯微鏡


            實驗步驟

             

            1、細胞傳代培養:當細胞長至80-90%時,去除培養基,加入PBS洗1-2次,去除PBS后,加入1ml胰酶消化1-3min后,加入3ml完全培養基中和胰酶終止消化,將消化的細胞轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min。倒掉上清后,加入3ml培養基重懸細胞,1:3傳代至培養皿中培養。

             

            2、將長到培養皿80%-90%的內皮細胞用胰酶消化下來,1000rpm離心,去除上清,加入完全培養基重懸細胞,將細胞分別種在6孔板中,每孔種1×106個細胞。

             

            3、待細胞貼壁后,使用不同的含藥血清的培養基培養細胞。

             

            4、48h后,加入DCFH-DA于培養基中,稀釋倍數為1:1000。

             

            5、孵育1h后,直接將細胞置于熒光顯微鏡下拍照。

             

             

            實驗結果

            ROS檢測熒光_wm.jpg

            細胞自噬MDC檢測 沒有了!
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